牛活体采卵OPU操作步骤
牛活体采卵(OPU)是继体外受精(IVF)和胚胎移植(ET)之后的用于牛胚胎实验操作和生产繁殖的一项非常实用的胚胎工程技术。OPU技术克服了屠宰场取卵巢和体内超数排卵的缺点，而且这项技术具有应用广泛、操作便利、高效和可重复性以及损伤小等优点。通过联合应用OPU和IVF这两种技术，可充分提高良种牛的繁殖潜力和大量生产高质量的胚胎。
牛活体采卵OPU操作步骤
OPU操作参照前，母牛站立保定，2mL利多卡因尾硬膜外麻醉及1 mL“846合剂II”肌注。清除直肠粪便，清洗外阴部，并用0.1%新洁尔灭消毒外阴部。将带有采卵针的探头轻缓插到阴道穹隆。
操作人员通过直肠隔着直肠壁将卵巢牵引至探头端部，根据显示屏图像，调整卵巢和探头的位置，使卵巢位于穿刺引导线上，推进采卵针，同时，用脚踏开关控制真空泵抽吸卵泡液，压力在100 mmHg左右(除实验1.3.4)，用DPBS(含3%BSA和%2 U/mL肝素)冲洗采卵针和导管，冲洗液也一同放人收集管。所有≥2 mm的卵泡均被穿刺，记录穿刺卵泡的数量。
将上述收集管中的收集液倒入拣卵杯中，用DPBS冲洗，拣出卵母细胞复合体移入培养皿，在体视显微镜下对COCs进行分级：A级，卵母细胞胞质均匀，至少5层以上卵丘细胞致密排列在卵母细胞周围;B级，卵母细胞胞质均匀，含1～5层卵丘细胞;C级，卵母细胞胞质均质度差，半裸、全裸卵或卵丘扩散卵。
